超分辨率光学显微镜

超分辨率光学显微镜

欧胜光镜设施的一部分

超分辨率显微镜是荧光显微镜的一种形式,它与下面阿贝的分辨率衍射极限的允许图像捕获。有不同的方式来实现众多ESTA导致各种方法:例如宽4PI显微镜,结构照明显微镜,受激发射损耗(STED),饱和光学荧光可逆转变(resoflt),风暴,棕榈,仅举几例。实现的空间分辨率不是由光的衍射允许许多生物结构在常规荧光显微术无法解析的观察的限制。该工厂拥有一项决议,允许低于衍射极限的3台沃尔夫森显微成像仪器。

联系方式:

SIM - 结构照明显微镜

结构照明显微镜(SIM)是基于使用图案化的照明。使用结构化的(图案化的)照明,而不是标准的均匀的照明,其中图像生成从样本和被混合的模式信息,使小的变化在样品荧光内显微镜的衍射极限。通过对样品的同一区域的多个不同的模式和如何处理这些模式所需的知识,软件可以被用来重建的超分辨率图像。可能的解决方案:2倍的改进相比于衍射限制成像(波长依赖性)〜120nm的(XY)和320nm的〜(z)的。该系统非常适合亮染培养的细胞和样品,并且可以被用于下的某些活细胞成像条件。

SIMOMX系统规格:

DeltaVision / GE OMX光学显微镜对结构照明(3D-SIM),ultimatefocus硬件自动对焦模块,X,Y,Z,样品台NANOMOTION随着-Z轴压电快速系统正(第4版); 6色宽视场的照明模块和TIRF环;温度和共2 控制;软件:DeltaVision OMX SoftWorx 6.0

激光线:405纳米,488纳米,568nm,642nm;  

镜头:60X 1.42 planapochromat油;阿婆60X 1.49 TIRF油

filtersets:

  • 31分之436(例如DAPI)
  • 48分之528(例如Alexa氟488)
  • 37分之609(例如Alexa氟568,mCherry的)
  • 40分之683(例如Alexa的面粉647,Cy5的)

在上述(:洛萨伊恩多比和Schermelleh,牛津作者)的下载的OMX和SIM本身encuentra进一步的信息。更多信息可以在我们的内部网页上找到。

另外,系统可用于FRAP实验和TIRF成像(TIRF环的建立)。

在OMX项目运行到目前为止,包括:

  • 渍新型细胞器
  • 在细菌细胞分裂
  • 维贝尔Palade小体的形成和分泌
  • 在多个敲除菌株的细菌细胞体积差

more STORM SIM results header

风暴:随机光学重构显微术/棕榈:光激活定位显微镜

PALM/STORM imaging relies on specific characteristics of the fluorophores used. Initially, all fluorophores are (effectively) in an off state. When imaging, a random subset of fluorophores are switched on and imaged before being driven back to an 'off' state. As only subsets of fluorophores are imaged at the same time and these are far apart and easily resolvable from each other, their locations can be approximated and recorded. This is carried out for many (>1000) frames allowing a high-resolution image to be formed from all single molecule fluorophore positions calculated. N-STORM uses dual fluorophore- labelled antibodies (labelled with activator (e.g. AF405, Cy3) and reporter (eg AF 647, Cy5)), dSTORM utilises reporter only labelled antibodies. PALM relies on photo-switchable/ - activatable fluorescent proteins. Possible resolution: ~30nm (xy) and ~ 50nm (z), ideal for fixed cells/ molecular structures.

STORM正风暴系统规范:

TI-NS正风暴随着3D能力,电动载物台控制器随着压电插入,对于阶段培养皿保持器和滑动架,温度控制的恒温箱,EM-CCD照相机,用于图像重构工作单独的PC;

激光线:405纳米,488纳米,561nm,647nm; 

镜头:SR APO TIRF 100倍; CFI APO TIRF 60X石油计划

filterset:四立方的蓝/绿/赤红色为止; EYFP和红色(用于MEOS优化)/远又冲可用组合

另请参阅在下载上面和我们的内部网页上的信息。

在n雨水径流项目,到目前为止,包括:

  • 在细菌细胞分裂
  • 四膜虫嗜热菌作为纤毛模式生物
  • 本地化和四次跨膜蛋白的聚类
  • 胚胎发育中细胞极性
  • 随着相关办法,结合原子力显微镜风暴(AFM)

推荐阅读

  • Lakadamyali(2014)chemphyschem,15:630-636;
  • 登普西等人去了。 (2012)自然 - 方法,8:1027至36年
  • Lippincott-Schwartz & Patterson (2009) Trends in Cell Biology, 19:555-565
  • Schermelleh等的。 (2010).J细胞生物学,190:165-175

airyscan

所述airyscan是共焦扫描显微镜采用的附加检测器。允许ESTA airyscan以检测与一个同心布置的六边形阵列检测器的荧光信号。每个阵列充当小针孔共焦,其允许针孔开放保持与在样品荧光的各点允许扩展通风磁盘的集合。来自阵列的信号然后重新分配给定位的正确/荧光原始点。与图像ESTA产生一种改进的信噪比和更高的分辨率。可实现分辨率在Z轴XY为120nm 350nm的及的范围内。在添加具有快速模式,可以获取每秒2帧(480×480像素)。在共焦模式5个FPS(512×512像素)是可能的。

蔡司系统规范airyscanairyscan microscope LMF

蔡司LSM 880倒置基于环境Axio上imager.z随着腔室控制能力FCS,快速压电Z,定义对焦系统,和电流计扫描器检测器的GaAsP

激光线:405纳米,458nm / 488nm处/ 514nm氩激光器,561nm,633nm的

镜头:5倍,10倍,20倍,40倍的水,油40X,63X油

filterset:用于airyscan探测器全套滤波器的

探测器:airyscan,磷砷化镓,二PMT,在共焦模式光谱检测器来调谐发射允许收集

也有我们的内部网页上的airyscan的更多信息。

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